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自身免疫性疾?。ˋutoimmune Diseases，ADs）是由免疫系統(tǒng)對自身抗原發(fā)起攻擊，導(dǎo)致細(xì)胞破壞、組織損傷或器官功能障礙而引起的慢性疾病。目前已確定的自身免疫性疾病有近100種，其中常見的有再生障礙性貧血、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病。由于ADs可能造成嚴(yán)重而廣泛的器官損害，ADs患者的健康相關(guān)生活質(zhì)量和勞動能力可能會降低。因此建立與人類自身免疫性疾病相似的動物模型是研究ADs的有效方法，有助于研究疾病的發(fā)病機制和有效的治療藥物。常見的自身免疫性疾病動物模型包括：

1 再生障礙性貧血模型

再生障礙性貧血（Aplastic Anemia，AA）是一類由多種原因造成骨髓細(xì)胞破壞、骨髓造血功能受損從而導(dǎo)致外周血全血細(xì)胞減少，臨床上出現(xiàn)貧血、感染、出血等特征的獲得性骨髓衰竭性綜合征。目前認(rèn)為T淋巴細(xì)胞異?；罨⒐δ芸哼M造成骨髓損傷在原發(fā)性獲得性AA發(fā)病機制中占主要地位。新近研究顯示輔助性T細(xì)胞亞群Th1/Th2分化偏移、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、NK細(xì)胞、Th17、樹突狀細(xì)胞（DC細(xì)胞）以及巨噬細(xì)胞等功能異常參與了AA發(fā)病。

1.1 異體淋巴細(xì)胞輸注聯(lián)合全身輻照的免疫介導(dǎo)AA模型

使用供鼠淋巴細(xì)胞輸注和全身輻照（TBI）聯(lián)用的方法建立免疫介導(dǎo)的AA模型。實驗通過將親代雄性和雌性DsRed轉(zhuǎn)基因小鼠配種后的子一代雌性小鼠（8～12周齡，體質(zhì)量18～22 g）的淋巴結(jié)單細(xì)胞懸液以5×106/只的劑量，通過尾靜脈注射注入經(jīng)過5 Gy的TBI 4 h后的雌性C.B10小鼠進行造模。

將DBA/2小鼠胸腺淋巴結(jié)混合細(xì)胞按照1×106/只的劑量由尾靜脈注入經(jīng)4Gy137銫-γ射線全身照射的雌性BALB/c小鼠進行造模。實驗小鼠的一般情況（小鼠精神狀況、死亡狀況、運動、外部形態(tài)及解剖后內(nèi)臟變化）和體質(zhì)量變化以及外周血（紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板）及骨髓有核細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)均符合AA的表現(xiàn)。

將雷帕霉素注入全身輻照聯(lián)合異體淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的AA模型中發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素可抑制T細(xì)胞中磷酸化S6和AKT的活性，表明雷帕霉素是通過調(diào)節(jié)mTOR的活性來發(fā)揮免疫抑制功能。

1.2 重組γ-干擾素聯(lián)合白消安的AA模型

使用小鼠源性重組γ-干擾素聯(lián)合白消安建立AA模型。實驗通過予以近交系雌性BALB/c小鼠2 mg/mL的白消安懸液灌胃10 d，并同時腹腔注射小鼠源性重組γ-干擾素（IFN-γ)7 500 U/d進行造模。

人和小鼠的γ-干擾素有65%同源性，且重組人γ-干擾素價格低廉，容易獲得，穩(wěn)定性好。使用重組人γ-干擾素聯(lián)合白消安建立AA模型。實驗通過用18 mg/（kg·d）的劑量予以雌性昆明小鼠2 g/L的白消安生理鹽水懸液灌胃7 d，并同時腹腔注射重組人γ-干擾素1×104U/d進行造模。

既往研究發(fā)現(xiàn)再生障礙性貧血患者骨髓和外周血中γ-干擾素明顯增多并且是導(dǎo)致AA最重要的細(xì)胞因子。一定濃度（750～1 000 U/mL)IFN-γ可提高造血祖細(xì)胞對凋亡的敏感性從而抑制造血祖細(xì)胞生長并且引發(fā)骨髓細(xì)胞和CD34+細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致AA。

白消安可以導(dǎo)致造血干細(xì)胞增殖缺陷并造成骨髓間質(zhì)損傷，從而誘導(dǎo)AA。

2 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種與慢性炎癥過程相關(guān)的系統(tǒng)性自身免疫病，目前認(rèn)為是由于瓜氨酸失調(diào)導(dǎo)致產(chǎn)生抗瓜氨酸蛋白抗體導(dǎo)致的。RA的主要臨床表現(xiàn)為對稱性、侵襲性小關(guān)節(jié)炎性反應(yīng)，可累及到關(guān)節(jié)外器官，導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和強直。RA發(fā)病涉及滑膜細(xì)胞增殖和纖維化、血管翳形成、軟骨和骨侵蝕等過程，TNF-α、IL-6和IL-1等炎性因子參與其發(fā)病。

2.1 佐劑誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（Adjuvant-Induced Arthritis，AA）模型

AA又稱弗氏佐劑關(guān)節(jié)炎，弗氏佐劑分為完全弗氏佐劑（CFA）和不完全弗氏佐劑（IFA），其作用機制是結(jié)核分枝桿菌致關(guān)節(jié)炎抗原為熱休克蛋白，RA患者軟骨內(nèi)具有與熱休克蛋白相似的蛋白多糖橋聯(lián)蛋白抗原成分，弗氏佐劑注入激活T細(xì)胞，從而參與RA發(fā)病機制。

實驗通常將100μL的完全弗氏佐劑通過皮下注射的方式注入雄性Wistar大鼠跖下區(qū)域來構(gòu)建AA模型。性別差異對佐劑誘導(dǎo)的RA模型有一定影響，雌性大鼠對體液免疫有較強的反應(yīng)，炎癥反應(yīng)更加強烈。

2.2 膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（Collagen-Induced Arthritis，CIA）模型

CIA主要由Th1、Th2兩種T細(xì)胞共同調(diào)節(jié)，原本處于平衡的Th1/Th2亞群會出現(xiàn)失衡狀態(tài)，血清中IL-1β、TNF-α水平會持續(xù)升高。

在小鼠尾部基部遠端2 cm處皮內(nèi)注射牛Ⅱ型膠原蛋白和CFA混合乳劑，第21天加強注射IFA混合乳劑也構(gòu)建出了CIA小鼠模型。在小鼠選擇方面，有實驗發(fā)現(xiàn)B10·RIII、C57BL/6(H-2b）等小鼠均可以構(gòu)建CIA模型，但是造模率不如DBA/1J小鼠。

將1 g/L的牛Ⅱ型膠原蛋白冰乙酸溶液混合制成乳液，在實驗的第1周和第2周分別向Wistar大鼠的趾或尾注射0.2 mL和0.1 mL的乳液構(gòu)建CIA模型。有研究顯示，將牛Ⅱ型膠原蛋白和CFA 1∶1(V∶V）配制成乳化劑，向大鼠尾部皮下注射0.2 mL，6 d后加強注射0.1 mL的IFA混合乳劑，也可制備關(guān)節(jié)炎模型。

3 系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）是一種多因素導(dǎo)致的復(fù)雜自身免疫性疾病，涉及多系統(tǒng)，涵蓋了表觀遺傳、遺傳、生態(tài)和環(huán)境因素，激活先天免疫和適應(yīng)性免疫，引發(fā)T細(xì)胞激活自身反應(yīng)性B細(xì)胞并導(dǎo)致免疫復(fù)合物在組織中沉積，從而觸發(fā)自身免疫級聯(lián)反應(yīng)，可能單一器官受損也可能導(dǎo)致全身性免疫反應(yīng)。目前尚不清楚SLE的確切病因，已知導(dǎo)致該病的主要因素包括日曬、懷孕、治療性流產(chǎn)、感染以及多種藥物。SLE的癥狀表現(xiàn)多種多樣，涵蓋了從輕微自愈的癥狀到嚴(yán)重威脅生命的器官受損的廣泛臨床表現(xiàn)。SLE的特征在于產(chǎn)生針對細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)抗原的抗體。

3.1 慢性移植物抗宿主?。╟GVHD）引發(fā)的狼瘡模型

將親代小鼠的淋巴細(xì)胞注射到C57BL/6-DBA/2 F1雜交體中，會引起持續(xù)性淋巴組織增生、產(chǎn)生高丙種球蛋白血癥和類似SLE的疾病，即慢性移植物抗宿主?。╟GVHD)。使用7～8周齡的雌性（C57BL/6-DBA/2J)F1雜交小鼠作為雌性DBA/2J供體淋巴細(xì)胞的受體，通過將含有來自供體胸腺、脾臟和淋巴結(jié)混合細(xì)胞的細(xì)胞懸液進行靜脈注射，成功建立了cGVHD模型的狼瘡性腎炎。

3.2 咪喹莫特（IMQ）誘發(fā)的狼瘡模型

IMQ屬于咪唑喹啉家族，最初被批準(zhǔn)用于作為一線合成治療藥物，用于治療人乳頭瘤病毒（HPV）感染引起的生殖器尖銳濕疣。TLR信號傳導(dǎo)的改變會在人類和小鼠模型中導(dǎo)致狼瘡的發(fā)生和/或惡化。漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（pDC）在SLE的發(fā)病機制中扮演關(guān)鍵角色，其通過TLR7激活后產(chǎn)生IFN-α。一項針對TLR-7轉(zhuǎn)基因小鼠的研究指出，增加TLR-7的特定劑量足以必要地促進具有RNA特異性的自身反應(yīng)性B細(xì)胞和骨髓細(xì)胞的增殖。目前，除了涉及pDC的機制外，IMQ誘導(dǎo)的狼瘡模型中TLR7刺激與狼瘡樣疾病發(fā)展之間的潛在關(guān)系尚不清楚。

3.3 降植烷誘導(dǎo)的系統(tǒng)性狼瘡小鼠模型

降植烷是一種天然存在的烴類化合物，已知在小鼠模型中無論其遺傳背景如何，都是觸發(fā)狼瘡特異性自身抗體的最有效化學(xué)物質(zhì)。類似于人類狼瘡受試者，單次腹腔內(nèi)施用碳?xì)浠衔锝抵餐椋═MPD）會引發(fā)干擾素特征、異常B細(xì)胞刺激和凋亡細(xì)胞清除缺陷。這個疾病的病理學(xué)包括自身抗核抗體（ANA）、免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎小球腎炎、貧血、肺毛細(xì)血管炎和關(guān)節(jié)炎的發(fā)展。

4 銀屑病模型

銀屑?。≒soriasis）是由T細(xì)胞控制的全身性疾病。銀屑病產(chǎn)生皮膚破損是由于淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞大量的浸潤皮膚。銀屑病斑塊產(chǎn)生的IFN-α導(dǎo)致髓質(zhì)細(xì)胞活化，DC細(xì)胞與T細(xì)胞相互作用的APC產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子如TNF-α、IL-23、IL-12、IL-6。這類細(xì)胞因子促進角質(zhì)形成細(xì)胞不斷增殖促使激活炎癥反應(yīng)。T細(xì)胞在銀屑病發(fā)病中起十分重要的作用：T細(xì)胞包括CD8+和Th1識別皮膚中的APC，并與真皮的DC細(xì)胞相互作用而釋放細(xì)胞因子IL-23、IL-12，促進Th1、Th17、Th22反應(yīng)使表皮細(xì)胞凋亡。其中Th1型CD4+T細(xì)胞誘發(fā)銀屑病過程中會釋放大量IFN-γ和TNF-α。TNF-α能夠與其他細(xì)胞因子相互作用放大炎癥作用，還可以誘導(dǎo)DC細(xì)胞產(chǎn)生IL-23促進Th17細(xì)胞增殖分化從而分泌IL-17，刺激角質(zhì)形成細(xì)胞增殖分化受損。角質(zhì)形成細(xì)胞受損釋放炎癥趨化因子和抗菌肽，招募免疫細(xì)胞聚集，進一步加重銀屑病。

4.1 局部使用IMQ小鼠模型

IMQ局部涂抹小鼠造模的原理是利用IMQ可以誘導(dǎo)IL-23/IL-17軸表達，增加脾臟Th17細(xì)胞。Alsabbagh提出，IMQ誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生于銀屑病相似的免疫反應(yīng)，是由于IL-23/IL-17軸和TNF-α免疫誘導(dǎo)而發(fā)病。

Van der Fits等將8～12周大的BALB/c和C57BL/6剃光小鼠背上和右耳上連續(xù)5到6 d涂抹62.5 mg 5%IMQ乳膏，即每天接受3.125 mg的活性化合物。同時對照組涂抹凡士林拉奈特乳膏。通過改良后的客觀評分系統(tǒng)對小鼠背部的炎癥嚴(yán)重程度進行評分。BALB/c小鼠在涂抹了5%的IMQ乳膏2～3 d后背部皮膚出現(xiàn)紅斑、脫屑。2種使用了咪喹莫特品系的小鼠均在實驗2～3 d后銀屑病炎癥癥狀逐漸出現(xiàn)，病情逐漸加重。實驗組小鼠的組織病理學(xué)特征顯示，小鼠的表皮分化紊亂；HE染色顯示有大量單核細(xì)胞浸潤。免疫組織化學(xué)分析顯示，經(jīng)IMQ處理的小鼠皮膚中IL-23/IL-17軸促炎細(xì)胞因子短暫增加，表明IL-23/IL-17軸參與銀屑病發(fā)病。

4.2 皮內(nèi)注射細(xì)胞因子小鼠模型

皮內(nèi)注射細(xì)胞因子小鼠模型是為探究銀屑病發(fā)病機制中的IL-23/IL-17通路開發(fā)的一種簡單快捷的誘導(dǎo)小鼠模型，可以在灌洗過程中快速讀出并檢測小鼠細(xì)胞因子水平。實驗采用5～8周齡雌性C57BL/6，建立小鼠氣袋腔6 d后注射抗CD3、IL-23和IL-17β銀屑病炎癥觸發(fā)混合物，結(jié)果表明小鼠氣袋腔的T細(xì)胞被激活。

對上述幾種常見ADs的造模方法及機制進行歸納總結(jié)如下表（參考文獻略）：

表1 自身免疫性疾病造模方法及機制

Table 1 Modeling Methods and Mechanisms of Autoimmune Diseases

5 總結(jié)

目前，很多ADs的發(fā)病機制和治療藥物效果并不明確，因此動物模型依舊是深入研究ADs的有效且必要工具。在AA的研究中，通常使用異體淋巴細(xì)胞輸注聯(lián)合全身輻照以及白消安聯(lián)合重組γ-干擾素構(gòu)建動物模型；對于RA的研究，佐劑誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型（AA）和膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎模型（CIA）因為具有操作簡單、造模速度快等優(yōu)點而被廣泛使用；在對SLE有關(guān)的研究中，通常使用c GVHD誘導(dǎo)的狼瘡模型、IMQ誘導(dǎo)型狼瘡模型和降植烷誘導(dǎo)型SLE模型；在構(gòu)建銀屑病的模型時，局部使用IMQ進行造模是最常見的。然而，很多ADs的相關(guān)模型還不能準(zhǔn)確模擬人類ADs的發(fā)病和臨床表現(xiàn)，例如目前大部分AA模型仍不符合人類再生障礙性貧血中T淋巴細(xì)胞過度活化的特征，因此仍然需要進一步探尋更加符合人類ADs的動物模型。